Dans le domaine de la recherche biologique et médicale moderne, l'analyse par hybridation in situ (ISH) est devenue une technique puissante pour visualiser et localiser des séquences d'acides nucléiques spécifiques dans des cellules ou des tissus. L'hybridation in situ par fluorescence (FISH), un sous-type d'ISH, utilise des sondes fluorescentes pour se lier à des séquences d'acides nucléiques complémentaires, permettant aux chercheurs de détecter et d'étudier des anomalies génétiques, des modèles d'expression génique, etc. En tant que fournisseur de scanners de lames à fluorescence, on me demande souvent si nos scanners peuvent être utilisés efficacement pour l'analyse d'hybridation in situ. Dans ce blog, j'explorerai cette question en détail.
Comprendre l'analyse d'hybridation in situ
L'analyse d'hybridation in situ est un processus en plusieurs étapes. Tout d’abord, les échantillons de tissus sont fixés et perméabilisés pour permettre l’entrée des sondes. Ensuite, des sondes d'acide nucléique spécifiques, marquées avec des isotopes radioactifs, des colorants fluorescents ou d'autres marqueurs, sont ajoutées aux échantillons. Ces sondes s'hybrident à leurs séquences complémentaires dans les acides nucléiques cibles. Après hybridation, les sondes non liées sont éliminées et les échantillons sont visualisés.
Le FISH, en particulier, offre plusieurs avantages. Il fournit des informations spatiales à haute résolution sur l'emplacement des séquences d'acides nucléiques dans les cellules et les tissus. Les signaux fluorescents peuvent être facilement détectés et quantifiés, et plusieurs sondes marquées avec différents fluorophores peuvent être utilisées simultanément pour détecter plusieurs séquences cibles.
Le rôle des scanners de lames à fluorescence dans l'analyse ISH
Un scanner de lames à fluorescence est un appareil qui capture des images numériques haute résolution de lames marquées par fluorescence. Il utilise une combinaison d'optiques, de sources lumineuses et de détecteurs pour scanner toute la zone de la diapositive et générer une représentation numérique des signaux fluorescents.
Avantages de l'utilisation de scanners de lames à fluorescence pour l'ISH
- Imagerie à haut débit: Dans de nombreux contextes de recherche et cliniques, un grand nombre de lames doivent être analysées. Les scanners de lames à fluorescence peuvent numériser automatiquement plusieurs lames, ce qui augmente considérablement le débit par rapport à la microscopie manuelle. Par exemple, dans un projet de recherche sur le cancer où des centaines d'échantillons de tissus doivent être criblés pour détecter des réarrangements génétiques spécifiques à l'aide de FISH, un scanner de lames peut terminer le processus d'imagerie en une fraction du temps qu'il faudrait à un chercheur utilisant un microscope à fluorescence traditionnel.
- Qualité d'image constante: La microscopie manuelle peut être sujette à une variabilité dans l'acquisition d'images en raison de différences dans la technique de l'opérateur, telles que les paramètres de mise au point et d'exposition. Les scanners de lames à fluorescence, quant à eux, sont programmés pour utiliser des paramètres d'imagerie cohérents pour chaque lame, garantissant ainsi que les images obtenues sont de qualité élevée et uniforme. Ceci est crucial pour une analyse quantitative précise des signaux fluorescents dans l’ISH.
- Archivage et analyse numériques: Une fois les diapositives numérisées, les images numériques peuvent être facilement stockées, partagées et analysées à l'aide d'un logiciel spécialisé. Cela permet un archivage à long terme des données et permet une recherche collaborative, car plusieurs chercheurs peuvent accéder et analyser les mêmes images numériques à distance. Par exemple, un groupe de recherche dans une partie du monde peut partager ses images FISH avec un collaborateur d'un autre pays pour un deuxième avis ou une analyse plus approfondie.
Nos scanners de lames à fluorescence et leur adéquation à l'ISH
Notre société propose une gamme de scanners de lames à fluorescence de haute qualité, notamment leScanner de pathologie numérique GScan - 60,Scanner de lames de microscope, etScanner de diapositives Brightfield EScan - 1200.
Le scanner de pathologie numérique GScan - 60 est conçu pour l'imagerie par fluorescence haute résolution. Il comporte un détecteur sensible capable de capturer avec précision les signaux fluorescents faibles, ce qui est souvent le cas dans l'analyse FISH où les sondes fluorescentes peuvent être présentes en faibles concentrations. Le scanner dispose également d'une platine de haute précision qui garantit un positionnement précis de la diapositive pendant la numérisation, minimisant ainsi le risque d'artefacts d'image.
Le scanner de lames de microscope est un instrument polyvalent qui peut gérer une variété de types de lames et convient à la fois à la recherche et aux applications cliniques. Il offre des options d'imagerie flexibles, permettant aux utilisateurs d'ajuster les paramètres de numérisation en fonction des exigences spécifiques de leurs expériences ISH. Par exemple, les utilisateurs peuvent choisir différents niveaux de grossissement et temps d'exposition pour optimiser la détection des signaux fluorescents.
Le Brightfield Slide Scanner EScan - 1200, bien que principalement conçu pour l'imagerie en fond clair, peut également être utilisé en combinaison avec l'imagerie par fluorescence dans certains cas. Il fournit des images en fond clair de haute qualité qui peuvent être utilisées pour visualiser la morphologie globale des tissus, tandis que l'imagerie par fluorescence peut être utilisée pour détecter les séquences d'acides nucléiques spécifiques d'intérêt.
Considérations relatives à l'utilisation de scanners de lames à fluorescence dans l'analyse ISH
Bien que les scanners de lames à fluorescence offrent de nombreux avantages pour l’analyse ISH, les chercheurs doivent également garder à l’esprit certaines considérations.
Préparation des échantillons
Une bonne préparation des échantillons est cruciale pour une analyse ISH réussie à l’aide d’un scanner de lames. Les échantillons de tissus doivent être fixés et traités correctement pour préserver l’intégrité des acides nucléiques et assurer une bonne hybridation des sondes. Une fixation excessive ou une perméabilisation inappropriée peut entraîner une accessibilité réduite de la sonde et des signaux fluorescents plus faibles. De plus, les diapositives doivent être propres et exemptes de débris pour éviter toute interférence avec le processus de numérisation.
Sélection de sonde fluorescente
Le choix des sondes fluorescentes est également important. Les sondes doivent avoir une spécificité élevée pour les séquences d'acide nucléique cibles et doivent émettre des signaux fluorescents forts et stables. Différents fluorophores ont des spectres d'excitation et d'émission différents, et le scanner de lames doit être compatible avec les fluorophores utilisés dans l'expérience ISH. Par exemple, si un chercheur utilise une sonde marquée avec un fluorophore rouge lointain, le scanner de lames doit avoir une source de lumière et un détecteur capables d'exciter et de détecter efficacement la fluorescence rouge lointain.
Analyse d'images
Une fois les diapositives numérisées, les images numériques doivent être analysées pour en extraire des informations significatives. Cela nécessite souvent un logiciel d’analyse d’images spécialisé. Le logiciel doit être capable de segmenter avec précision les signaux fluorescents de l’arrière-plan, de quantifier l’intensité des signaux et de fournir une analyse statistique si nécessaire. Certains scanners de diapositives sont livrés avec un logiciel d'analyse d'image intégré, tandis que d'autres peuvent nécessiter l'utilisation d'un logiciel tiers.
Conclusion
En conclusion, les scanners de lames à fluorescence peuvent être utilisés efficacement pour l’analyse d’hybridation in situ. Ils offrent une imagerie à haut débit, une qualité d'image constante et la possibilité d'archiver et d'analyser numériquement les données. Notre gamme de scanners de lames à fluorescence, comprenant leScanner de pathologie numérique GScan - 60,Scanner de lames de microscope, etScanner de diapositives Brightfield EScan - 1200, sont bien adaptés aux applications ISH.
Si vous êtes impliqué dans l'analyse d'hybridation in situ et recherchez un scanner de lames à fluorescence fiable, nous vous encourageons à nous contacter pour plus d'informations et pour discuter de vos besoins spécifiques. Notre équipe d'experts est prête à vous aider à sélectionner le scanner le plus approprié pour vos besoins de recherche ou cliniques et à vous accompagner tout au long du processus d'achat.
Références
- Speel, EJ, Hopman, AH et Ramaekers, FC (2001). Protocoles d'hybridation in situ. Médias scientifiques et commerciaux Springer.
- Levsky, JM et Singer, RH (2003). Hybridation in situ par fluorescence : passé, présent et futur. Journal of Cell Science, 116(10), 1995-2004.
- Trask, BJ (2002). Cytogénétique humaine : 46 chromosomes, 46 ans et plus. Nature Reviews Genetics, 3(11), 769-778.
